Los contadores automáticos de células se basan en el principio de Coulter (Wallace H. Coulter, quien fue pionero en la medición del volumen y recuento de partículas sanguíneas), con el paso del tiempo se han realizado modificaciones en los equipos que han mejorado su precisión, exactitud y fiabilidad.
Hoy se encuentran en le mercado diferentes modelos y marcas de equipos automatizados de contadores de células ejemplos de ellas son los siguientes:
La citometría de flujo es una técnica que permite obtener información sobre poblaciones celulares a partir de un estudio individualizado de un gran número de células (habitualmente entre 5000 y 10000) que por tanto serán una muestra lo suficientemente representativa del conjunto poblacional. Y tiene como fundamento que una suspensión de células en solución isotónica se hace pasar a través de un pequeño orificio de modo que cuando salen lo hacen una a una (en fila india) formando parte de una corriente continua o flujo cilíndrico.
Sobre esta corriente de células se hace incidir un haz de luz laser, cuya dispersión y reflexión son analizadas en duración, intensidad y espectro, los datos obtenidos almacenados en memoria de ordenador y desde allí pasadas a archivos binarios que posteriormente pueden ser analizados con detenimiento. Ejemplo del fundamento del citómetro de flujo:
Esquema del funcionamiento de un clitómetro de flujo
FUENTE DE LUZ
Aunque existen modelos antiguos de clitómetros con fuente emisora de lámpara de arco, la casi totalidad de los modelos actuales llevan una fuente emisora laser. La luz emitida por el laser es una mezcla de longitudes de onda, conocidas como líneas laser, definidas por la energía emitida por el electrón al caer de una órbita alta a otra baja. La longitud de onda utilizadas en citofluorometria son 488, 568, 630 y 647 nm siendo la primera la más habitual. Los laser ultravioleta cada vez se usan menos debido a que han ido apareciendo fluorocromos excitables con luz visible que pueden sustituir perfectamente a los que solo se podrán utilizar en UV.
Los clitómetros de investigación suelen equipar varios laser, sin embargo los de rutina trabajan con longitud de onda del fija (casi siempre 488 nm).
Los emisores laser más empleados son los de helio-neón (atómicos), argon-kripton (iónicos) y helio-cadmio (moleculares). Recientemente se han empezado a introducir los basados en semiconductores (laser diodo).
FLUOROCROMOS
Son productos químicos que al ser estimulados con fotones con longitud de onda comprendida entre determinados rangos (de excitación) emiten a su vez otro fotón de longitud de onda mayor (de emisión). El prototipo es la fluoresceína que al ser estimulada con luz ultravioleta (no visible) emite luz de color verde (visible) aunque existen muchos otros como picoeritrina, rodamina, rojo de texas etc.
Fluorescencias múltiples. Es posible combinar a la vez dos o tres colorantes fluorescentes siempre que emitan en diferente longitud de onda y nuestro fluorometro sea capaz de excitarlos a la vez y discriminar los fotones emitidos por ellos. Los colorantes más utilizados son la citada fluoresceína con excitación máxima a 495 nm y emisión máxima a 520 nm, y la picoeritrina con excitación a 495 y emisión a 576 nm lo que permite utilizarlos simultáneamente con un laser de 488 nm.